细胞培养常见问题分析

🔺培养细胞生长缓慢

可能原因

1.由于更换不同培养液或血清；

2.培养液中一些细胞生长必须成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏；

3.培养物中有少量细菌或真菌污染；

4.试剂保存不当；

5.接种细胞起始浓度太低；

6.细胞已老化；

7.支原体污染。

解决方法

1.比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验，让细胞逐渐适应新培养液；

2.换入新鲜配置培养液，或补加谷氨酰胺及生长因子；

3.用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物；

4.血清需保存在-10到-20℃。培养液需在2-8℃避光保存。含血清完全培养液在2-8℃保存，需在1周内用完；

5.增加接种细胞起始浓度；

6.换用新的保种细胞；

7.分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。

🔺污染

1. 支原体污染；

2. 霉菌污染。

培养基或血清

1. 更换血清或培养基之前未进行验证；

2. 选择的培养基是否合适；

3. 培养基配制是否合适；

4. 培养基配制是否准确无误。

🔺培养环境

1. CO2供应是否正常；

2. 培养箱或摇床温度控制是否正确。

解决方法

根据以上四个方面的可能原因，做出针对性的解决方案

1.注意细胞的本身状态：如传代次数，接种量等；

2.避免产生污染（用正规，合法，可朔源的血清）；

3.要用合适的血清或培养基，最好经过验证；

4.注意实验室的环境。

🔺培养细胞死亡

可能原因

1.培养箱内无CO2；

2.培养箱内温度波动太大；

3.细胞冻存或复苏过程中损伤；

4.培养液渗透压不正确；

5.培养液中有毒代谢产物堆积。

解决方法

1.检测培养箱内CO2；

2.检查培养箱内温度；

3.取新的保存细胞种；

4.检测培养液渗透压；

5.换入新鲜培养液；

🔺培养细胞不贴壁

可能原因

1.胰蛋白酶消化过度；

2.支原体污染；

3.培养基pH值过碱（NaHCO3分解）；

4.细胞老化；

5.接种细胞起始浓度太低或太高。

解决方法

1.缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度；

2.分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物；

3.使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2；

4.启用新的保种细胞；

5.调节最佳接种细胞浓度。

🔺悬浮细胞成簇

可能原因

1.培养液中含钙,镁离子；

2.支原体污染；

3.蛋白酶过度消化使得细胞裂解；

4.DNA污染。

解决方法

1.用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻巧吹吸2.细胞获得单细胞悬液；

3.分离培养物，检测支原体；

4.DNasel处理细胞。

BI品牌特级胎牛血清优势：

1. 指标好，内毒素低，利于细胞的生长，不会导致细胞过早的凋亡，有利于下游产物的纯化，其他重要指标都处于国际一流水平，检测方法完全符合国际标准或美国药典。

2. 品质有保证，BI公司的血清生产完全符合cGMP的生产要求，并通过了ISO13485: 2003和ISO9001: 2008质量认证，符合USDA标准，并有欧洲药品监督管理局颁发的EDQM证书，可以用于制药行业。

3. Biological Industries（BI）血清种类齐全，可以满足所有血清用户的需求。

4. BI品牌的多种血清都提供了热灭活的包装，减少了实验室自行热灭活的工作，并最大限度降低了热灭活对血清的负面影响。

5. 胚胎干细胞专用血清及TET系统专用血清都经过相关实验严格筛选及验证，出售的FBS原料来源于根据世界动物卫生组织（OIE）认可的未发生疯牛病BSE）疫情的国家，确保其质量安全。

1、 特级胎牛血清

BioInd特级胎牛血清经过3次100nm过滤，内毒素及血红蛋白含量极低，适合于大多数细胞的培养。

2、胚胎干细胞及间充质干细胞专用胎牛血清

BioInd对不同批号的血清（10%胎牛血清）进行细胞培养来筛选，在既定条件下测定未分化细胞克隆数（ES-D3鼠多能性细胞，ATCC，CRL-1934），筛选出保持干细胞未分化状态良好的胚胎干培养专用胎牛血清血清，能很好的支持胚胎干细胞的体外培养及研究。

间充质干细胞专用胎牛血清经筛选适合间充质干细胞的培养。

3、热灭活胎牛血清

血清热灭活通过提高血清温度到56度并且保持该温度30分钟完成。热灭活可以破坏补体，用于细胞表面抗原抗体研究。对于大多数细胞而言，热灭活并非必须，多个实验表明，热灭活对于提高细胞培养效果并无改善，而且热灭活会使血清沉淀增加，除非必须，否则不建议做血清热灭活。

4、活性炭过滤胎牛血清（炭吸附胎牛血清）

脱碳胎牛血清用于体外培养验证激素的作用效果。研究包括类固醇受体连接，细胞受体类固醇调节，各种组织激素分泌和甲状腺激素功能。生产程序为使用活性碳和右旋糖苷去除胎牛血清中的激素。