胃蛋白酶检测试剂盒（微量法 100T/48S）
| 货号 | SH0592 | 售价（元） | 576 |
| 规格 | 100T/48S | CAS号 |
- 产品简介
- 相关产品
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货号 |
名称 |
规格 |
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SH0592 |
胃蛋白酶（Pepsin）检测试剂盒（微量法 100T/48S） |
100T/48S |
测定意义：
胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌，分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别，慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。
测定原理：
胃蛋白酶可催化血红蛋白水解，水解产物与福林试剂反应后显蓝色；一定范围内，其颜色的深浅与胃蛋白酶活性呈正比。
组成：
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产品名称 |
SH0592-100T/48S |
Storage |
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试剂一：液体 |
100ml |
4℃ |
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试剂二：液体 |
20ml |
4℃ |
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试剂三：粉剂 |
1瓶 |
4℃避光 |
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试剂四：粉剂 |
1瓶 |
4℃ |
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试剂五：粉剂 |
1瓶 |
4℃ |
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试剂六：液体 |
3.3ml |
4℃ |
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标准品：液体 |
1.27ml |
4℃ |
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说明书 |
一份 |
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试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入10ml试剂二充分溶解。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入10ml蒸馏水充分溶解。
试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入15ml蒸馏水充分溶解。
标准品：液体1.27ml×1支，0.5μmol/ml酪氨酸标准溶液浓度4℃保存。
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液提取：
组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。
测定步骤：
1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至580nm，蒸馏水调零。
2. 试剂三和试剂四置于37℃水浴预热30min。
3. 标准管：取微量玻璃比色皿/96孔板，加入20μl标准品，40μl试剂二，120μl试剂五，20μl试剂六，混匀后室温静置20min，于580 nm测光吸收，记为A标准管。
4. 空白管：取微量玻璃比色皿/96孔板，加入20μl蒸馏水，40μl试剂二，120μl试剂五，20μl试剂六，混匀后室温静置20min，于 580 nm测光吸收，记为A标准空白管。
5. 对照管：取 EP管，加入100 μl蒸馏水，置于37℃水浴保温10min；加入100μl试剂四，盖紧后摇匀1min；加入20μl粗酶液，混匀后8000g 4℃离心10分钟取上清；在微量玻璃比色皿/96孔板加入上清液20μl，再加入40μl试剂二，120μl试剂五，20μl试剂六，混匀后室温静置20min，于580 nm测光吸收，记为A空白管。
6. 测定管：取 EP管，加入20μl粗酶液，100μl试剂三，置于37℃水浴保温10min；加入100μl试剂四，盖紧后摇匀1min；8000g 4℃离心10分钟取上清；在微量玻璃比色皿/96孔板加入上清液20μl，再加入40μl试剂二，120μl试剂五，20μl试剂六，混匀后室温静置20min，于 580 nm测光吸收，记为A测定管。
注意：空白管和标准管只需要测定一次。
计算公式：
a.使用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下
（1）按蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成1nmol酪氨酸为1个酶活单位。
胃蛋白酶活性（nmol/min/mg prot）= C标准品×（A测定管－A对照管）÷（A标准管－A空白管）×稀释倍数÷（Cpr×V1）÷T
=27500×（A测定管－A对照管）÷（A标准管－A空白管）÷Cpr
（2）按样本质量计算
活性单位定义：37℃每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成1nmol酪氨酸为1个酶活单位。
胃蛋白酶活性（nmol/min/g 鲜重）= C标准品×（A测定管－A对照管）÷（A标准管－A空白管）×稀释倍数÷（W×V1÷V2）÷T
=27500×（A测定管－A对照管）÷（A标准管－A空白管）÷W
C标准品：标准品浓度，0.5 μmol/ml酪氨酸；稀释倍数：（20+100+100）÷20=11；Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/ml），需要另外测定；V1：加入反应体系中粗酶液体积（ml），20μl=2×10-2ml；W：组织质量（g）；V2：粗酶液总体积（ml），1ml；T：催化反应时间（min），10min。
b.使用96孔板测定的计算公式如下
（（1）按蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成1nmol酪氨酸为1个酶活单位。
胃蛋白酶活性（nmol/min/mg prot）= C标准品×（A测定管－A对照管）÷（A标准管－A空白管）×稀释倍数÷（Cpr×V1）÷T
=27500×（A测定管－A对照管）÷（A标准管－A空白管）÷Cpr
（2）按样本质量计算
活性单位定义：37℃每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成1nmol酪氨酸为1个酶活单位。
胃蛋白酶活性（nmol/min/g 鲜重）= C标准品×（A测定管－A对照管）÷（A标准管－A空白管）×稀释倍数÷（W×V1÷V2）÷T
=27500×（A测定管－A对照管）÷（A标准管－A空白管）÷W
C标准品：标准品浓度，0.5 μmol/ml酪氨酸；稀释倍数：（20+100+100）÷20=11；Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/ml），需要另外测定；V1：加入反应体系中粗酶液体积（ml），20μl=2×10-2ml；W：组织质量（g）；V2：粗酶液总体积（ml），1ml；T：催化反应时间（min），10min。
注意事项
试剂三、试剂四、试剂五临用前配制，配制好用不完的试剂4℃可保存一周。