测定意义：

血钙几乎全部存在于血浆中，所以血钙主要指血浆钙。血浆钙有离子钙和结合钙两种形式，其中只有离子钙直接起生理作用，它与结合钙处于动态平衡，并受血液pH的影响。血钙水平与多种重要的生理功能相关，过高或过低都会影响正常生理功能。本试剂盒用于检测血液中游离钙浓度。

测定原理：

在强碱溶液中游离钙与GBHA反应生成红色钙-GBHA复合物，在520nm有吸收峰；通过测定520nm吸光度，计算游离钙浓度。

组成：

试剂三：液体×1瓶（空瓶，试剂自备）。取10ml试剂瓶。依次加入9ml无水甲醇和1ml丙酮，盖紧混匀即可。

标准液：液体×1瓶，0.3μmol/ml，4℃保存。

自备仪器和用品：

可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、石英比色皿/96孔板、无水甲醇、丙酮和蒸馏水。

血钙浓度测定操作：

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长到520nm，蒸馏水调零。

2. 空白管：取石英比色皿/96孔板，依次加入蒸馏水12 μl，试剂一50μl，混匀；再加入试剂二50μl，混匀；最后加入试剂三100μl，混匀；静置5min后于520 nm测定吸光度A空白管。做一个空白管即可。

3. 标准管：取石英比色皿/96孔板，依次加入标准液12μl，试剂一50 μl，混匀；再加入试剂二50μl，混匀；最后加入试剂三100μl，混匀；静置5min后于520 nm测定吸光度A标准管。做一个标准管即可。

4. 测定管：取石英比色皿/96孔板，依次加入血液样品12μl，试剂一50 μl，混匀；再加入试剂二50μl，混匀；最后加入试剂三100μl，混匀；静置5min后于520 nm测定吸光度A测定管。记为A测定管。

注意：空白管和标准管只需测定一次。

血钙浓度计算公式：

血钙含量(μmol /dL)= [C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×V样品总

=30×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)

C标准液：0.3μmol/ml； V样总：样品总体积，1 dL=100ml。

注意事项：

1、宜早晨空腹采血，并且采血后应该尽快完成测定。

2、静置5分钟后立即测定。

3、加试剂三后，应该在30 min内完成该管的测定。

4、最低检出限为1mmol/L。