产品简介

       本试剂盒在磁珠捕获法的基础上进行改良优化，添加了CD9/CD81/CD63 三种磁珠可特异性捕获EVs表面的标志性蛋白。以CD9磁珠为例，EVlent中的功能化磁珠可以高效地将EVs捕获到装配了EVs特征蛋白CD9抗体的修饰珠上，这些磁珠对EVs表面的CD9蛋白具有独特亲和性；可满足多种下游实验需求，如外泌体-细胞共培养实验、蛋白组学研究、NGS高通量测序和WB检测等。

产品组分及储存条件

操作流程

1. 血浆样本离心(2000 g、5-10min)取上清备用，-80 ℃长期保存，避免反复冻融。

2. 取200 μL血浆，加入800 μL预冷Incubation buffer Ⅰ，室温混匀。

3. 加入40 μL EVlent magnetic beads，室温摇匀孵育2-3 h。

4. 用磁力架磁吸3 min，分离弃去上清，再加入1 mL Incubation buffer Ⅱ，上下颠倒摇匀20次，磁吸分离弃去上清。

5. 加入1 mL Washing Buffer，上下颠倒摇匀20次，磁吸3 min分离弃去上清。重复该步骤2次。

以下步骤需根据下游实验需求，选择相应的操作方法：

若下游为蛋白组学研究（优先推荐）

a. 将步骤5得到的beads，加入50 μL Lysis buffer ；

b. 按照实验室常规的组学前处理步骤处理即可，或者选用组学前处理试剂盒（YW006）进行处理快速且高效。

若下游为WB表征研究

a. 将步骤5得到的beads，加入4×LDS 上样缓冲液（B0007, Invitrogen）；

b. 95℃煮5 min后，磁性分离后，吸取上清进行PAGE胶上样。

若下游为NTA和TEM检测

a. 加入100 μL Elution Buffer，涡旋震荡10 min后，磁吸3 min收集上清。

b. 再次加入100 μL Elution Buffer，涡旋震荡10 min后，磁吸3 min收集合并上清。

备注：若下游为NTA/TEM检测则需酌情增加血浆样本量，建议500 μL效果更佳。

注意事项和免责声明

       1.磁珠静置后会沉淀，每次使用磁珠前请温和、充分的震荡，使磁珠保持均匀的悬浮状态。

       2.Elution Buffer有刺激性气味，请尽量在通风橱内使用。

       3.磁珠保存及使用过程中应避免冷冻、干燥和高速离心等操作，否则会破坏磁珠结构，影响蛋白结合能力。

       4.本产品仅限于专业人员的科学研究使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。