产品信息

dsDNA 定量试剂盒是荧光检测双链 DNA 并进行定量 的一种产品，这种方法非常灵敏。常用于分子生物学技术中的：cDNA 文库的构建；用于亚克隆的  DNA 片段纯化及应用，比如进行 DNA 定量、产物扩增和引物的进一步检测。 疫苗是现代疾病预防中常用的控制方式。如今许多疫苗是细胞培养疫苗，比如重组乙肝疫苗、狂犬病疫苗等大多数疫苗都采用细胞培养的方法生产。其中，疫苗的纯化是关键问题，我们需要尽可能的去除宿主细胞DNA和宿主蛋白。假若宿主细胞的DNA和蛋白同疫苗一起注入人体将会产生不可预料的后果。

常规的DNA含量的检测方法是在260nm（A260）处测其吸光值。这种方法的主要缺点是核苷酸、单链核酸和蛋白质对信号的影响很大，并且还会受到核酸制备过程中污染物的干扰，无法区分DNA和RNA，而且这种方法不灵敏（5μg/mLdsDNA溶液A260=0.1）。PicoGreen定量检测方法简单、方便，被多家生物制品厂所选择，成为生物制品残留DNA检测的标准。

检测原理：与DNA双链结合后才发出的荧光，无DNA不发荧光；所发荧光与DNA浓度成正比。Green定量DNA的方法检出限约0.3ng/ml，DNA含量在1.25-80ng/mL范围时线性较好(R2>0.99).

优势：

1.该方法可以测定来源于任何表达宿主样品中的双链DNA。

2.可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。

3.远远超出传统紫外A260的检测方法和Hoechst33258的灵敏度。

4.较高浓度的盐，尿素，乙醇，氯仿，去垢剂，蛋白或琼脂糖对测定无影响。

5.在等摩尔浓度 ssDNA 和 RNA 存在的条件下测定 dsDNA，其影响很小。

实验步骤

Green dsDNA 定量试剂是以 1mL 的浓缩液形式保存在无水的 DMSO（二甲基亚砜）中。实 验当天，配制 2XGreen 试剂的操作溶液，用 1xTE 按 1:200 的比例稀释浓缩液（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH7.5）。如果要准备足够的操作溶液测定 20 个样品，可在 20mL1x TE 中加入 100μL Green dsDNA 定量试剂。由于试剂容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。PicoGreen 试剂 见光易降解，所以应将配好的溶液用箔包住或放置暗处避光保存。

溶液最好在配制好数小时内使用，以保证最佳结果。

实验方法：

1). 标准品工作液的配制：

 Sigma小牛胸腺嘧啶DNA干粉（货号：D4522-1MG）1mg（Tris，Nacl等浓度已成标准体系），加入1mL双蒸水，配制成1mg∕mL的标准品工作液；

2). 染料工作液的配置：

6 uLGreen加入1mL TE(注意：用1×TE将FBKGreen稀释200倍，现用现配，注意避光)。

3). 标准品工作液稀释：

（1）母液稀释：取10ul（1mg∕mL）标准品工作液加入到990ul TE溶液中，浓度稀释成10ug∕mL，取10ul（10ug∕mL）标准品工作液加入到990ul TE溶液中，浓度稀释成100ng∕mL；

（2）倍比稀释：取800ul （100ng∕mL）的标准品工作液加入到200ul TE溶液中，浓度达到80ng∕mL（药典规定：荧光染色方法DNA含量在1.25-80 ng/mL范围线性较好， 该法DNA检出限为0.3 ng/ml），取500ul（80ng∕mL）的标准品工作液加入到500ul TE溶液中，浓度稀释到40ng∕mL；依次倍比稀释，配成20ng/ml、10ng/ml、5.0ng/ml、2.5ng/ml、1.25ng/ml、0.625ng/ml的标准品溶液；

5). 测量剩余样品的荧光值。荧光计将给出一个直接的浓度读数，数据可以用来产生DNA 浓度的标准曲线。