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Zeocin 博来霉素(溶液)

货号 M1117 售价(元) 3036
规格 10×100mg CAS号 11006-33-0
  • 产品简介
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产品信息

货号

产品名称

规格

价格

M1115

Zeocin 博来霉素(溶液)

100mg

380

M1117

Zeocin 博来霉素(溶液)

10×100mg

3036

M1119

Zeocin 博来霉素(溶液)

50×100mg

12886

M1215

Zeocin 博来霉素(粉末)

1g

2755

M1217

Zeocin 博来霉素(粉末)

5g

10379

产品简介

Zeocin是腐草霉素D1(Phleomycin D1)的商业名称,其中文名称博来霉素是一种铜离子螯合的糖肽抗生素(来源于链霉菌Streptomyces verticillus的突变株),铜离子的存在使其呈蓝色,此铜螯合的形式为无活性。当抗生素进入细胞后,二价铜离子(Cu2+)被还原为一价铜离子(Cu+),并被细胞内的巯基化合物去除。铜离子被去除后,Zeocin被活化,嵌入DNA使其断裂,最终导致细胞死亡。博来霉素是作用谱广泛,对细菌、真核微生物、植物和哺乳动物细胞具很强的毒性。博来霉素常用作一种非常有效的工具抗生素,用来筛选携带Sh ble抗性基因并能稳定表达分子量为13.665 kDa的一种博来霉素抗性蛋白的细胞株。博来霉素是的用量为 50-2000 ug/ml(通常 300 ug/ml),具体取决于细胞类型。

warbio公司提供无菌溶液形式的Zeocin,浓度是100mg/ml,使用起来更加方便,只需直接加入培养基到所需工作浓度即可。

产品性质

分子式(Formula):C55H85O21N20S2Cu - HCl

Cas: 11006-33-0

分子量(Molecular Weight):1535

外观(Appearance):蓝色粉末

内毒素:<1 EU/mg

纯度(Purity):>90%(HLPC)

溶解性:易溶于水(>500 mg/ml)

细胞培养测试:在 Zeocin® 敏感和 Zeocin® 抗性哺乳动物细胞系中验证效力

微量污染物无细胞毒性:在抗 Zeocin® 细胞中证实不存在长期影响

应用参考浓度:

1)大肠杆菌筛选:25-50μg/mL(低盐LB培养基,NaCl浓度不能超过5g/L)

2)酵母菌筛选:50-300μg/mL(YPD或基本培养基)

3)哺乳动物细胞筛选:50-1000μg/mL(合适培养基,根据细胞系而不同)

使用步骤参考

一、细胞对Zeocin敏感性的确定(杀灭曲线建立)

重新铺板或者将满盘细胞重新分盘,使得细胞密度约25%,按照8个平板/组准备,培养24h,去除旧培养基。

加入含不同浓度Zeocin的筛选培养基,Zeocin浓度可设置为0, 50, 100, 200, 400, 600, 800和1000 μg/ml,每个浓度做3个平行;也可根据自身实验体系,设置不同的浓度梯度。

每3-4天更换新鲜的筛选培养基,并观察存活细胞的比例。选择在合适时间(1-2周内)杀死大多数细胞的浓度为最加工作浓度。【注】:若是难以在显微观察下区分活细胞,建议使用台盼蓝染色来计算存活细胞的数量,以确定Zeocin的最适浓度。

二、筛选稳定转染细胞系

转染细胞,用100mm培养皿进行培养。以未转染的细胞作为阴性对照。

转染后,用预热的1X PBS洗涤一次,加入新鲜培养基。

转染48-72h后,用含有最加浓度Zeocin(由灭杀曲线确定)的新鲜培养基筛选细胞。为了更好的鉴定和筛选细胞集落,建议将细胞按比例稀释成一系列浓度。

【注】:若待筛选细胞对Zeocin的抗性明显强于大部分细胞,按照以下方法克服此类耐性:用含Zeocin培养基进行细胞分盘,置于37°C孵育2-3h,使得细胞贴壁。然后将细胞置于4°C,2h。记得使用Hepes作为培养基的缓冲体系。重新将细胞置于37°C孵育。4°C孵育细胞的目的是短时间内终止细胞分化,使得Zeocin能发挥作用,杀死细胞。

每3-4天更换新鲜的选择培养基,直到出现细胞集落。

挑选并转移克隆到96或48孔板中。在进行更大孔径培养板或培养皿上扩大培养之前,确保培养细胞密度近100%。

三、稳定转染细胞系的维持培养

可采取以下方式维持培养稳定转染细胞:

1)使用含相同剂量Zeocin的筛选培养基来维持培养;

2)降低Zeocin剂量为原来的一半进行维持培养;

3)使用正好能预防敏感细胞生长但不足以致死的Zeocin剂量来维持培养【根据杀灭曲线来判断】。

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货号

产品名称

规格

储存

M0943

潮霉素B Hyaromycin B  

1g

650

M0942

潮霉素B(50 mg/ml)Hygromycin B (50 mg/ml)

1g

680

M9337

Blasticidin S (10 mg/ml) 杀稻瘟菌素S (灭瘟素)(10 mg/ml)

5×10mg

2450

M0336

Phleomycin (20mg/ml) 腐草霉素(20 mg/ml)

20mg

921

M2150

Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐

25mg

678

CB937

Vancomycin Hydrochloride 盐酸万古霉素

1g

1868

注意事项:  

Zeocin™对光敏感,需将抗生素,或含该抗生素的平板或培养基置于黑暗处。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

运输与保存

储存-30°C~-10°C,使用前需冰上融化。