产品信息

产品简介

鬼笔环肽（Phalloidin）的结合阻止丝状肌动蛋白（微丝）的解离，稳定微丝结构，从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度（CC）降至＜1µg/mL，因此，可用作一种聚合促进剂。此外，鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。

本品为鬼笔环肽- TRITC（四甲基异硫氰酸罗丹明）标记探针会选择性地结合F-肌动蛋白。以纳摩尔浓度使用，鬼笔环肽衍生物是方便的探针，用于标记，鉴定和定量甲醛固定和透化组织切片中的F-肌动蛋白，细胞培养物或无细胞实验。肌动蛋白是一种球状的，大约42kDa的蛋白质，几乎存在于所有真核细胞中。 它也是最高度保守的蛋白质之一，与藻类和人类不同的物种相差不超过20％。 肌动蛋白是细胞中两种细丝的单体亚基：微丝，细胞骨架的三个主要组分之一，以及微丝，是肌细胞中收缩装置的一部分。 因此，肌动蛋白参与许多重要的细胞过程，包括肌肉收缩，细胞运动，细胞分裂和胞质分裂，囊泡和细胞器运动，细胞信号传导，以及细胞连接和细胞形状的建立和维持。

产品性质

1.分子式（Molecular Formula）：C60H70N12O13S2

2.分子量（Molecular Weight）：1231.4

3.最大激发/发射波长（Ex/Em）: 540～546/565～575nm

4.多肽序列（Sequence）: TRITC-bicyclic(Ala-DThr-Cys-cis-4-hydroxy-Pro-Ala-2-mercapto-Trp-4-hydroxy-5-amino-L   eu)(S-3 to 6)

5.外观（Appearance）: 紫色粉末（冻干粉）

6.溶解性（Solubility）: 溶于 DMSO、DMF、甲醇或者乙腈水溶液（20%）

本品以1000×储存液形式（溶于DMSO）提供，按照100µl/孔（96孔板），总共可做300T。

warbio 生物也提供粉末形式，浓度自行配置使用, 可直接溶于甲醇或DMSO配置成适当浓度的储存液。之后用PBS或PBS+1% BSA稀释到合适的工作浓度。常用工作浓度范围80-200nM。

注意事项：   

鬼笔环肽的分子量小，很容易通过细胞，不需要对细胞进行冷丙酮和TRITON X-100处理。毒性较大，戴上手套操作。

自备实验材料

1.1 TRITC-鬼笔环肽（货号LX4530）

1.2 1×PBS Buffer（pH 7.4）, for Cell Culture（货号 SH30256.01）

1.3 固定液（溶于PBS的4%多聚甲醛，pH 7.0）

1.4 破膜液（溶于PBS的0.5% Triton X-100）

1.5 抗荧光淬灭剂

1.6 （可选）即用型PI染色液（货号 4209）

1.7 （可选）BSA, Standard Grade（货号 J8660）

1.8 盖玻片密封液（透明指甲油）

操作步骤

1. 工作液准备

1）对于TRITC-鬼笔环肽（货号：LX4530）

本品以溶于甲醇的20µM储存液形式提供，总量为300µl。按照100 nM的工作液浓度来换算，可制备总量为60 ml的工作液。建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，-20℃避光冻存，一年稳定。

开始实验前，使用1×PBS缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。推荐工作浓度为：80~200nM。工作液现配现用。

2）对于TRITC-鬼笔环肽（（货号：LX4532）

Warbio生物以冻干粉形式提供，分子量为 1231.4，总量为 1mg。可先用甲醇或者DMSO充分溶解配制成20~100µM的储存液。如，加入8.494ml甲醇到1mg鬼笔环肽即得到100µM等量的储存液，根据单次使用量，进行小量分装，-20℃避光冻存，一年稳定。

开始实验前，使用1×PBS缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。推荐工作浓度为：80~200nM。工作液现配现用。

2. 染色步骤

1）细胞爬片生长24h，使其密度达到50%汇合度。

2）吸掉培养液，37℃预热的1×PBS（pH 7.4）清洗细胞2次。

3）使用溶于PBS的4%甲醛溶液进行细胞固定，室温固定10min。

注意：避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。

4）室温条件下，用PBS清洗细胞2~3次，每次10min。

5）室温条件下，用丙酮（≤-20℃）脱水或者用0.5% Triton X-100溶液透化处理5min。

6）室温条件下，用PBS清洗细胞2~3次，每次10min。

7）取200µl配制好的 FITC标记鬼笔环肽工作液，覆盖住盖玻片上的细胞，室温避光孵育30min（通常情况下，4℃~37℃孵育皆可）。

注意：为了降低背景，可于FITC标记的鬼笔环肽工作液内加入1% BSA；另外，孵育过程中为了避免溶液挥发，可将盖玻片转移到一个密封的容器内。

8）用PBS清洗盖玻片3次，每次5min。

9）使用200µl DAPI溶液（浓度：100 nM）对细胞核进行复染，约30s。

10）用PBS清洗盖玻片，然后倒置在已经滴有一滴Fluoromount-GTM 水溶性封片剂的载玻片上。使用纸巾轻轻檫掉多余封片剂，然后用指甲油永久封片。此法制备的标本玻片可置于4℃避光保存，通常6个月内可继续做F-actin染色分析。

注意：也可以直接使用含有DAPI的抗荧光淬灭封片剂（合并步骤9）10），简化步骤。

11）荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察，选择FITC激发/发射滤片（Ex/Em=496/516nm）和DAPI激发/发射滤片（Ex/Em=364/454nm）。

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