AF594 Phalloidin 鬼笔环肽-AF594
| 货号 | LX2610 | 售价（元） | 4092 |
| 规格 | 300T | CAS号 |
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产品信息
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货号 |
名称 |
规格 |
价格/元 |
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LX2610 |
鬼笔环肽-AF594 AF594 Phalloidin |
300T |
4092 |
产品简介
鬼笔环肽（Phalloidin）的结合阻止丝状肌动蛋白（微丝）的解离，稳定微丝结构，从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度（CC）降至＜1µg/mL，因此，可用作一种聚合促进剂。此外，鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。
笔环肽-AF594标记探针会选择性地结合F-肌动蛋白,一般在纳摩尔浓度下使用，鬼笔环肽衍生物是非常方便的荧光探针，用于标记、鉴定和定量甲醛固定和透化组织切片中的F-肌动蛋白，细胞培养物或无细胞实验。肌动蛋白是一种球状的，大约42kDa的蛋白质，几乎存在于所有真核细胞中。 它也是最高度保守的蛋白质之一，与藻类和人类不同的物种相差不超过20％。肌动蛋白参与许多重要的细胞过程，包括肌肉收缩、细胞运动、细胞分裂和胞质分裂、囊泡和细胞器运动、细胞信号传导，以及细胞连接和细胞形状的建立和维持。
鬼笔环肽比肌动蛋白单体更紧密地结合肌动蛋白丝，导致肌动蛋白亚基从丝状末端解离的速率常数降低，基本上通过防止丝解聚来稳定肌动蛋白丝。此外，发现鬼笔环肽抑制F-肌动蛋白的ATP水解活性。鬼笔环肽在细胞中以不同浓度起作用不同。当以低浓度引入细胞质时，鬼笔环肽将较少聚合形式的细胞质肌动蛋白以及微丝蛋白聚集成聚集的肌动蛋白聚合物的稳定“岛”，但它不会干扰应力纤维，即厚的微丝束。鬼笔环肽的性质是通过用荧光类似物标记鬼笔环肽并用它们染色肌动蛋白丝用于光学显微镜来研究F-肌动蛋白在细胞中的分布的有用工具。鬼笔环肽的荧光衍生物已经证明在定位活细胞或固定细胞中的肌动蛋白丝以及在体外可视化单个肌动蛋白丝方面非常有用。荧光鬼笔环肽衍生物已被用作高分辨率肌动蛋白研究中的重要工具。
本品以1000×储存液形式（溶于DMSO）提供，按照100µl/孔（96孔板），总共可做300T。
注意事项：
鬼笔环肽 的分子量小，很容易通过细胞，不需要对细胞进行冷丙酮和TRITON X-100处理。毒性较大，戴上手套操作。
有几种方法都能用来染色组织细胞培养物内的肌动蛋白丝（F-actin）染色，其中，固定步骤在获得可信且具代表性的细胞F-actin分布情况中至关重要。固定步骤基于实验自身需求来选择。多聚甲醛或戊二醛都能得到优秀的F-actin染色和良好的板状伪足维持保存。
操作步骤
1.制备1X鬼笔环肽缀合物工作溶液：加入1μL1000X鬼笔环肽缀合物DMSO溶液至1 mL含1％BSA的PBS。
注意1：鬼笔环肽缀合物的未使用的1000X DMSO储备溶液应等分并储存在-20℃，避光。
注意2：不同的细胞类型可能染色不同。 应相应地制备鬼笔环肽缀合物工作溶液的浓度。
2.染色细胞：
2.1执行甲醛固定。 在室温下将含3.0-4.0％甲醛的细胞在PBS中孵育10-30分钟。
注意：避免使用任何含甲醇的固定剂，因为甲醇会在固定过程中破坏肌动蛋白。 优选的固定剂是不含甲醇的甲醛。
2.2用PBS冲洗固定的细胞2-3次。
2.3可选：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定细胞3至5分钟，以增加渗透性。 用PBS冲洗细胞2-3次。
2.4将100μL/孔（96孔板）鬼笔环肽缀合物工作溶液加入固定的细胞，并在室温下染色细胞20至90分钟。
2.5在加上盖玻片之前，用PBS轻轻冲洗细胞2至3次以除去过量的鬼笔环肽缀合物，然后在显微镜下进行，密封和成像。
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